基于B、T淋巴细胞衰减因子及氧化应激探讨新风胶囊治疗强直性脊柱炎的作用机制

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(TAOC)、活性氧(ROS)、活性氮(RNS)、丙二醛(MDA)的变化及新风胶囊(XFC)对其影响。方法将120例AS患者按随机数字表法分为两组:XFC组(60例)和柳氮磺胺吡啶(SASP)组(60例)。两组均治疗3个月。60名健康体检者为健康对照组(NC组)。采用流式细胞术检测患者外周血BTLA表达频率及活化水平;采用酶联免疫分析法检测两组血清中氧化应激指标(SOD、CAT、TAOC、ROS、RNS、MDA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-10含量;采用魏氏法检测炎性指标血沉(ESR);采用日立7060型全自动生化分析仪检测超敏C反应蛋白(Hs-CRP);采用VAS及ASAS 20、BASDAI 50评定疗效;并进行生活质量评分及BTLA表达频率的相关分析。结果(1)与SASP组比较,XFC组ASAS 20及BASDAI 50疗效更优,差异有统计学意义(P0.01)。(2)与NC组比较,AS患者外周血BTLA表达显著降低(P0.05);SOD、CAT、TAOC值显著降低(P0.01,P0.05);ROS、RNS、MDA值显著升高(P0.01,P0.05);TNF-α、IL-1β、ESR、Hs-CRP值显著升高(P0.01),IL-4、IL-10值显著降低(P0.01,P0.05)。(3)与本组治疗前比较,治疗后两组外周血BTLA/CD19+B、BTLA/CD24+B、SOD、TAOC、IL-4、SF-36量表8个维度积分值均显著升高,ROS、MDA、TNF-α、ESR、Hs-CRP、VAS、BASDAI 50、BASFI、BAS-G均显著降低(P0.01,P0.05)。XFC组在升高BTLA/CD19+B、BTLA/CD24+B、SOD、TAOC、IL-10、BP、MH、VT、SF及降低ROS、IL-1β、MDA、TNF-α、ESR、Hs-CRP、VAS、BASDAI、BASFI、BAS-G方面优于SASP组(P0.01,P0.05)。(4)Pearson相关分析结果显示:外周血BTLA/CD19+B与SOD、CAT、TAOC、IL-4、IL-10、GH、RP、BP、SF呈正相关(r分别为0.431,0.325,0.318,0.316,0.348,0.314,0.358,0.318,0.326;P0.05,P0.01),与ROS、MDA、TNF-α、IL-1β、ESR、VAS、BASDAI呈负相关(r分别为-0.342;-0.368,-0.334,-0.354,-0.324,-0.372,-0.342,P0.05,P0.01)。BTLA/CD24+B与SOD、TAOC、IL-4、IL-10、GH、RP、BP、SF、RE、MH、VT亦呈正相关(r分别为0.358,0.352,0.372,0.436,0.435,0.326,0.352,0.345,0.326,0.343,0.332;P0.05,P0.01),与ROS、RNS、MDA、ESR、Hs-CRP、VAS、BASDAI、BASFI呈负相关(r分别为-0.447,-0.336,-0.405,-0.395,-0.358,-0.436,-0.338,-0.425;P0.05,P0.01)。结论 XFC能提高AS患者外周血BTLA表达,负性调节B细胞的激活与增殖,降低异常免疫反应和氧化应激损伤,从而有效减轻关节僵痛症状。     

类风湿关节炎患者细胞凋亡与临床指标相关性分析

目的观察寒湿型类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血CD4~+T淋巴细胞凋亡基因表达,探讨其与RA疾病临床指标的相关性。方法选取16例寒湿型RA患者(RA组)和16名健康人(对照组),应用FCM检测RA组及对照组CD4~+T细胞凋亡率,应用RT-PCR法检测凋亡基因fas、fasL、caspase-8、caspase-3、bcl-2、bax mRNA相对表达水平;分析凋亡基因与临床活动指标[ESR、CRP、RF、CCP、中医证候积分、关节晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、关节功能分级及28个关节数疾病活动度评分(disease activity scores that include different 28-joint counts,DAS28)]相关性。结果与对照组比较,RA组CD4~+T细胞凋亡率降低[(2.6±0.9)%vs.(7.7±1.3)%,P0.01],RA组CD4~+T fas、fasL、caspase-8、caspase-3、bax mRNA相对表达降低,bcl-2升高(P0.01)。CD4~+T细胞凋亡率与ESR呈负相关(P0.05),caspase-8与关节肿胀数呈负相关(P0.05),bcl-2与中医证候积分和关节功能分级亦呈负相关(P0.01,P0.05)。结论 RA患者外周血CD4~+T淋巴细胞存在凋亡障碍,并且与疾病的活动性密切相关。     

215例湿热型强直性脊柱炎中药治疗数据挖掘及关联规则研究

目的 应用数据挖掘技术和关联规则分析安徽中医药大学第一附属医院风湿科中医论治湿热型强直性脊柱炎（AS）用药对患者免疫炎症及超氧化物歧化酶（SOD）指标的影响。方法 基于数据挖掘技术,对安徽中医药大学第一附属医院风湿科215例2012年6月—2015年6月湿热型AS住院患者的病历资料进行回顾性研究。结合复杂网络技术挖掘其核心处方,并采用SPSS Clementine 12.0软件Aprior模块分析中药对免疫炎症及SOD指标的影响。结果 （1）对其中药处方进行分析,核心用药为：薏苡仁、陈皮、山药、茯苓、泽泻、蒲公英、白花蛇舌草、桃仁、红花、丹参、豨莶草、威灵仙、杜仲、狗脊、甘草。核心药物使用均在50%以上,其中以健脾药使用最多,药物以归脾、胃、肾经为主。（2）在关联规则最小置信度设为60%,最小支持度设为20%条件下提取值与指标关联较高的药对,山药配伍独活、黄柏分别与C3、C4关联度较高（置信度为85.19%,93.33%）,与茯苓配伍与hs-CRP关联度高（置信度为78.10%）;茯苓配伍知母与IgA、IgG关联度较高（置信度为83.33%,91.67%）;黄柏配伍桃仁与ESR关联度较高（置信度为85.71%）;豨莶草配伍蒲公英、独活分别与SOD、WBC关联度较高（置信度为85.71%,75.93%）。外用药芙蓉膏、消瘀接骨散与ESR、hs-CRP、SOD关联度较高。结论 根据各用药的比例分析,本院风湿科治疗湿热型AS以从脾论治为主,兼顾肝肾,配伍祛风除湿、清热解毒、活血化瘀等药物的配方原则;并且中药内服及外用,与免疫炎症及SOD指标关联性高。     

新风胶囊对类风湿关节炎患者肺功能的影响

目的观察新风胶囊对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者肺功能、外周血B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及氧化应激的影响。方法 100例RA患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组50例。治疗组予新风胶囊(0.5 g/粒,每次3粒,每日3次),对照组予来氟米特片(0.1 g/片,每次1片,每晚1次);两组均为1个疗程。检测患者肺功能参数:用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)、最大呼气流量(peak expiratory flow,PEF)、25%肺活量位的最大呼气流量(25%maximal expiratory flow-volume,MEF25)、50%肺活量位的最大呼气流量(50%maximal expiratory flow-volume,MEF50)、25%~75%肺活量位的最大呼气流量(25%-75%maximal expiratory flow-volume,MEF25-75)。观察患者血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)水平变化,以RA疾病活动性评分系统(disease activity score in 28 joints,DAS28)评定疾病活动度。检测BTLA表达,血清中氧化指标丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,TAOC)、IL-4、IL-35、IL-17和TNF-α水平。结果与本组治疗前比较,治疗后两组FEV1、PEF、MEF25-75、MEF50和MEF25均升高(P0.05,P0.01),ESR、hs-CRP和DAS28均降低(P0.01),外周血BTLA~+、CD19~+、CD24~+、CD19~+CD24~+、CD24~+BTLA~+、SOD、TAOC、IL-4和IL-35水平升高(P0.01,P0.05),ROS、MDA、TNF-α和IL-17降低(P0.01,P0.05);与对照组比较,治疗组治疗后FVC、MEF25-75、MEF50和MEF25升高(P0.05,P0.01),ESR、hs-CRP和DAS28降低(P0.05,P0.01);治疗组治疗后外周血BTLA~+、CD24~+、CD19~+CD24~+、TAOC和TNF-α升高(P0.05),CD24~+CD19~+、ROS和MDA降低(P0.01,P0.05)。结论 RA患者普遍存在肺功能降低和BTLA表达的减弱,且疾病活动性与机体BTLA表达减弱,氧化应激失衡密切相关。新风胶囊在改善RA患者关节症状的同时,可通过提高BTLA表达,减轻免疫炎症和氧化应激对组织的损伤,从而影响患者肺功能。     

黄芩清热除痹胶囊含药血清对强直性脊柱炎患者外周血单核细胞氧化应激的影响

目的?探讨黄芩清热除痹胶囊（HQC）含药血清对强直性脊柱炎（AS）患者外周血单核细胞（PBMCs）氧化应激的影响。方法?将40只大鼠按随机数字表法分为HQC低、中、高剂量组，空白组、阴性组（生理盐水），其中HQC低、中、高3组大鼠连续给药7天处死取血清；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测HQC含药血清对PBMCs增殖的影响；将PBMCs分为正常组、模型组、HQC组、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂（Compound C）组、HQC含药血清+Compound C组；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醇（MDA）、脂质过氧化产物（LPO）、总抗氧化能力（TAOC）的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹（Western Blot）检测AMPK/叉头转录因子O3a（FOXO3a）/锰超氧化物歧化酶（MnSOD）信号通路相关基因及蛋白的表达。结果?中剂量HQC含药血清具有显著抑制PBMCs增殖的作用，确定其最佳作用时间为24 h。与正常组比较，模型组MDA、LPO明显升高，SOD、TAOC明显降低（P<0.01）；与模型组比较，HQC、HQC+Compound C组MDA、LPO明显降低，SOD、TAOC明显升高（P<0.01），Compound C组MDA、LPO明显升高，SOD、TAOC明显降低（P<0.01）；与Compound C组比较，HQC+Compound C组MDA、LPO明显降低，SOD、TAOC明显升高（P<0.01）；与正常组比较，模型组AMPK、FOXO3a、MnSOD mRNA及AMPK、p-AMPK、FOXO3a、p-FOXO3a、MnSOD蛋白表达水平明显降低（P<0.01）；与模型组比较，HQC组AMPK、FOXO3a、MnSOD mRNA及AMPK、p-AMPK、FOXO3a、p-FOXO3a、MnSOD蛋白表达水平明显升高（P<0.01），Compound C组AMPK、FOXO3a、MnSOD mRNA及AMPK、p-AMPK、FOXO3a、p-FOXO3a、MnSOD蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；与Compound C组比较，HQC+Compound C组AMPK、FOXO3a、MnSOD mRNA及AMPK、p-AMPK、FOXO3a、p-FOXO3a、MnSOD蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论?HQC含药血清能通过活化AMPK、FOXO3a、MnSOD信号通路，改善AS患者PBMCs氧化应激。     

基于Act1/NF-κB信号通路探讨类风湿关节炎患者血瘀状态的机制及新风胶囊对其影响

目的基于Act1/NF-κB信号传导通路研究新风胶囊(Xinfeng Capsule,XFC)改善类风湿关节炎患者血瘀状态的机制。方法将76例RA患者按随机数字表法分为2组:XFC组(3粒/次,每日3次)和来氟米特(LEF)组(10 mg/次,每日1次),每组38例,连续治疗3个月。评定两组中医证候临床疗效;ELISA法检测血清白介素-10(Interleukin-10,IL-10)、IL-6、IL-17、核因子κB激活蛋白1抗体(NF-κB activator 1,Act1)、p50、p65,血小板凝聚因子(platelet activating factor,PAF)、血小板活化因子乙酰水解酶(platelet activating factor acetyl hydrolase,PAF-AH);评定血瘀证症状的评分;采用荧光定量PCR法检测Act1、p65、p50mRNA表达;Western blot法检测p50、p65蛋白表达。采用Spearman方法对RA患者外周血凝血指标及血瘀证总积分与IL-10、IL-6、IL-17、Act1、p50、p65之间进行相关性分析。结果 XFC组总有效率为89.5%(34/38);LEF组总有效率为94.7%(36/38),两组总有效率比较,差异无统计学意义(P0.05)。与本组治疗前比较,两组治疗后D-D、FBG、PLT、PAF、IL-17及IL-6水平下降,Act1、p50、p65mRNA表达及含量水平降低,p50、p65蛋白水平降低,血瘀证各个症状评分均降低,而PAF-AH及IL-10水平上升(P0.05,P0.01);与LEF组比较,XFC组治疗后D-D、FBG、PLT、IL-17及IL-6水平下降,Act1、p65mRNA表达及含量水平降低,p 65蛋白表达降低,关节刺痛、舌质、皮下瘀斑及血瘀证总积分的评分均明显降低(P0.05,P0.01)。RA外周血D-D与IL-17、IL-6、Act1、p65呈正相关,与IL-10呈负相关(P0.05,P0.01);FBG与IL-6呈正相关(P0.05);PLT与IL-17呈正相关(P0.05);血瘀证总积分与IL-6、Act1、p65呈正相关,与IL-10呈负相关(P0.05,P0.01);PAF与IL-17、IL-6、Act1、p65呈正相关(P0.05,P0.01);PAF-AH与p50呈负相关(P0.05)。结论 RA患者血瘀状态的发生机制及新风胶囊对血瘀状态的影响可能是与Act1/NF-κB信号传导通路密切相关。